促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）ELISA試劑盒準確性

促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）ELISA試劑盒用于測定猴血清、血漿及相關(guān)液體樣本中促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）含量。

實驗原理
促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）ELISA試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中猴促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）水平。用純化的猴促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH），再與HRP標記的促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的。顏色的深淺和樣品中的促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中猴促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）濃度。

·準確性：標準品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值，大于等于0.9900。 
·靈敏度：zui低檢測濃度小于10 pg/ml。 
·特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。 
·重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。 

促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）ELISA試劑盒操作步驟
1. 加樣：分別設(shè)空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。
為保證實驗結(jié)果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。
2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加生物素標記抗體工作液 100μl（取1μl生物素標記抗體加99μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內(nèi)配制），37℃,60分鐘。
3. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。 
4. 每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液（同生物素標記抗體工作液） 100μl，37℃，60分鐘。
5. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。
6. 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。
7. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)）。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準確性，底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。 在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行檢測。